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A melamina hè un contaminante alimentariu ricunnisciutu chì pò esse presente in certe categurie d'alimenti sia accidentalmente sia intenzionalmente. U scopu di stu studiu era di verificà a rilevazione è a quantificazione di a melamina in u latte artificiale per lattanti è in u latte in polvere. Un totale di 40 campioni alimentari dispunibili cummercialmente, cumpresi u latte artificiale per lattanti è u latte in polvere, da diverse regioni di l'Iran sò stati analizati. U cuntenutu apprussimativu di melamina di i campioni hè statu determinatu utilizendu un sistema di cromatografia liquida à alte prestazioni-ultraviolettu (HPLC-UV). Una curva di calibrazione (R2 = 0,9925) hè stata custruita per a rilevazione di melamina in l'intervallu di 0,1-1,2 μg mL−1. I limiti di quantificazione è di rilevazione eranu 1 μg mL−1 è 3 μg mL−1, rispettivamente. A melamina hè stata testata in u latte artificiale per lattanti è in u latte in polvere è i risultati anu dimustratu chì i livelli di melamina in i campioni di latte artificiale per lattanti è di latte in polvere eranu 0,001-0,095 mg kg−1 è 0,001-0,004 mg kg−1, rispettivamente. Questi valori sò in cunfurmità cù a legislazione di l'UE è u Codex Alimentarius. Hè impurtante nutà chì u cunsumu di sti prudutti di latte cù un cuntenutu riduttu di melamina ùn rapprisenta micca un risicu significativu per a salute di i cunsumatori. Questu hè ancu sustinutu da i risultati di a valutazione di u risicu.
A melamina hè un cumpostu organicu cù a formula moleculare C3H6N6, derivatu da a cianamide. Hà una solubilità assai bassa in acqua è hè circa 66% d'azotu. A melamina hè un cumpostu industriale largamente utilizatu cù una vasta gamma d'usi legittimi in a pruduzzione di plastiche, fertilizanti è apparecchiature di trasfurmazione alimentaria (cumpresi l'imballaggi alimentari è l'utensili di cucina)1,2. A melamina hè ancu aduprata cum'è vettore di medicinali per u trattamentu di e malatie. L'alta proporzione di azotu in a melamina pò purtà à un usu impropriu di u cumpostu è à trasmette e proprietà di e molecule di proteine ​​à l'ingredienti alimentari3,4. Dunque, l'aghjunta di melamina à i prudutti alimentari, cumpresi i prudutti lattieri, aumenta u cuntenutu di azotu. Cusì, hè statu erroneamente cunclusu chì u cuntenutu di proteine ​​di u latte era più altu di ciò chì era in realtà.
Per ogni grammu di melamina aghjuntu, u cuntenutu di proteine ​​di l'alimentu aumenterà di 0,4%. Tuttavia, a melamina hè assai solubile in acqua è pò causà danni più serii. Aghjunghje 1,3 grammi di melamina à i prudutti liquidi cum'è u latte pò aumentà u cuntenutu di proteine ​​di u latte di 30%5,6. Ancu s'è a melamina hè aghjunta à l'alimenti animali è ancu umani per aumentà u cuntenutu di proteine7, a Cummissione di u Codex Alimentarius (CAC) è l'autorità naziunali ùn anu micca appruvatu a melamina cum'è additivu alimentariu è l'anu listata cum'è periculosa s'ella hè inghjuttita, inalata o assorbita per a pelle. In u 2012, l'Agenzia Internaziunale per a Ricerca nantu à u Cancru di l'Organizazione Mondiale di a Salute (OMS) hà listatu a melamina cum'è cancerogenu di Classe 2B perchè pò esse dannusu per a salute umana8. L'esposizione à longu andà à a melamina pò causà cancru o danni à i reni2. A melamina in l'alimentu pò cumplessà si cù l'acidu cianurico per furmà cristalli gialli insolubili in acqua chì ponu causà danni à u tissutu renale è vescicale, è ancu cancru di e vie urinarie è perdita di pesu9,10. Pò causà intossicazione alimentaria acuta è, in alte concentrazioni, a morte, in particulare in i neonati è i zitelli chjuchi.11 L'Organizazione Mondiale di a Salute (OMS) hà ancu fissatu a dosa ghjurnaliera tollerabile (TDI) di melamina per l'omu à 0,2 mg/kg di pesu corpu per ghjornu basatu annantu à e linee guida CAC.12 L'Amministrazione di l'Alimentazione è di i Medicinali di i Stati Uniti (FDA) hà fissatu u livellu massimu di residui per a melamina à 1 mg/kg in a formula per i zitelli è 2,5 mg/kg in altri alimenti.2,7 In settembre 2008, hè statu signalatu chì parechji pruduttori naziunali di formule per i zitelli avianu aghjuntu melamina à u latte in polvere per aumentà u cuntenutu di proteine ​​di i so prudutti, risultendu in avvelenamentu da latte in polvere è pruvucendu un incidente naziunale di avvelenamentu da melamina chì hà malatu più di 294.000 zitelli è uspitalizatu più di 50.000. 13
L'allattamentu ùn hè micca sempre pussibule per via di diversi fattori cum'è e difficultà di a vita urbana, a malatia di a mamma o di u zitellu, chì porta à l'usu di latte artificiale per alimentà i zitelli. Di cunsiguenza, sò state create fabbriche per pruduce latte artificiale u più vicinu pussibule à u latte maternu in cumpusizione14. U latte artificiale vendutu in u mercatu hè generalmente fattu da latte di vacca è hè generalmente fattu cù una mistura speciale di grassi, proteine, carboidrati, vitamine, minerali è altri cumposti. Per esse vicinu à u latte maternu, u cuntenutu di proteine ​​è grassi di a formula varia, è secondu u tipu di latte, sò arricchiti cù cumposti cum'è vitamine è minerali cum'è u ferru15. Siccomu i zitelli sò un gruppu sensibile è ci hè un risicu d'avvelenamentu, a sicurezza di u cunsumu di latte in polvere hè di vitale impurtanza per a salute. Dopu à u casu d'avvelenamentu da melamina trà i zitelli cinesi, i paesi di u mondu sanu anu prestatu molta attenzione à questu prublema, è a sensibilità di questu duminiu hè ancu aumentata. Dunque, hè particularmente impurtante rinfurzà u cuntrollu di a pruduzzione di latte artificiale per prutege a salute di i zitelli. Ci sò diversi metudi per rilevà a melamina in l'alimentu, cumprese a cromatografia liquida à alte prestazioni (HPLC), l'elettroforesi, u metudu sensoriale, a spettrofotometria è u test immunosorbente ligatu à l'enzimi antigene-anticorpu16. In u 2007, l'Amministrazione di l'Alimentazione è di i Medicinali di i Stati Uniti (FDA) hà sviluppatu è publicatu un metudu HPLC per a determinazione di a melamina è di l'acidu cianurico in l'alimentu, chì hè u metudu u più efficace per determinà u cuntenutu di melamina17.
E cuncentrazioni di melamina in a formula per i zitelli misurate cù una nova tecnica di spettroscopia infrarossa variavanu da 0,33 à 0,96 milligrammi per chilogramu (mg kg-1). 18 Un studiu in Sri Lanka hà trovu chì i livelli di melamina in u latte interu in polvere variavanu da 0,39 à 0,84 mg kg-1. Inoltre, i campioni di formula per i zitelli impurtati cuntenianu i livelli più alti di melamina, rispettivamente à 0,96 è 0,94 mg/kg. Quessi livelli sò inferiori à u limite regulatoriu (1 mg/kg), ma hè necessariu un prugramma di monitoraghju per a sicurezza di i cunsumatori. 19
Parechji studii anu esaminatu i livelli di melamina in e formule per i zitelli iraniane. Circa u 65% di i campioni cuntenianu melamina, cù una media di 0,73 mg/kg è un massimu di 3,63 mg/kg. Un altru studiu hà signalatu chì u livellu di melamina in a formula per i zitelli variava da 0,35 à 3,40 μg/kg, cù una media di 1,38 μg/kg. In generale, a presenza è u livellu di melamina in e formule per i zitelli iraniane sò stati valutati in diversi studii, cù alcuni campioni chì cuntenenu melamina chì supera u limite massimu stabilitu da l'autorità regulatorie (2,5 mg/kg/alimentu).
Cunsiderendu l'enorme cunsumu direttu è indirettu di latte in polvere in l'industria alimentaria è l'impurtanza particulare di a formula per i zitelli in l'alimentazione di i zitelli, questu studiu hà avutu cum'è scopu di validà u metudu di rilevazione di a melamina in u latte in polvere è a formula per i zitelli. In fatti, u primu scopu di questu studiu era di sviluppà un metudu quantitativu rapidu, simplice è precisu per rilevà l'adulterazione di melamina in a formula per i zitelli è u latte in polvere utilizendu a cromatografia liquida à alte prestazioni (HPLC) è a rilevazione ultravioletta (UV); Siconda, l'ughjettivu di questu studiu era di determinà u cuntenutu di melamina in a formula per i zitelli è u latte in polvere venduti in u mercatu iranianu.
L'istrumenti utilizati per l'analisi di a melamina varianu secondu u locu di pruduzzione alimentaria. Un metudu d'analisi HPLC-UV sensibile è affidabile hè statu utilizatu per misurà i residui di melamina in u latte è in a formula per i zitelli. I prudutti lattieri cuntenenu diverse proteine ​​è grassi chì ponu interferisce cù a misurazione di a melamina. Dunque, cum'è nutatu da Sun et al. 22, una strategia di pulizia adatta è efficace hè necessaria prima di l'analisi strumentale. In questu studiu, avemu utilizatu filtri di siringa dispunibili. In questu studiu, avemu utilizatu una colonna C18 per separà a melamina in a formula per i zitelli è u latte in polvere. A Figura 1 mostra u cromatogramma per a rilevazione di a melamina. Inoltre, a recuperazione di i campioni chì cuntenenu 0,1-1,2 mg/kg di melamina variava da 95% à 109%, l'equazione di regressione era y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), è i valori di deviazione standard relativa (RSD) variavanu da 0,8 à 2%. I dati dispunibili indicanu chì u metudu hè affidabile in l'intervallu di concentrazione studiatu (Tabella 1). U limite strumentale di rilevazione (LOD) è u limite di quantificazione (LOQ) di a melamina eranu 1 μg mL−1 è 3 μg mL−1, rispettivamente. Inoltre, u spettru UV di a melamina hà mostratu una banda d'assorbimentu à 242 nm. U metudu di rilevazione hè sensibile, affidabile è precisu. Stu metudu pò esse adupratu per a determinazione di rutina di u livellu di melamina.
Risultati simili sò stati publicati da parechji autori. Un metudu di cromatografia liquida d'alta prestazione-array di fotodiodi (HPLC) hè statu sviluppatu per l'analisi di a melamina in i prudutti lattieri. I limiti inferiori di quantificazione eranu 340 μg kg−1 per u latte in polvere è 280 μg kg−1 per a formula per i zitelli à 240 nm. Filazzi et al. (2012) anu signalatu chì a melamina ùn hè stata rilevata in a formula per i zitelli da HPLC. Tuttavia, l'8% di i campioni di latte in polvere cuntenenu melamina à un livellu di 0,505-0,86 mg/kg. Tittlemiet et al.23 anu realizatu un studiu simile è anu determinatu u cuntenutu di melamina di a formula per i zitelli (numeru di campione: 72) per cromatografia liquida d'alta prestazione-spettrometria di massa/MS (HPLC-MS/MS) à circa 0,0431-0,346 mg kg−1. In un studiu realizatu da Venkatasamy et al. (2010), un approcciu di chimica verde (senza acetonitrile) è una cromatografia liquida ad alte prestazioni in fase inversa (RP-HPLC) sò stati utilizati per stimà a melamina in a formula per lattanti è in u latte. L'intervallu di cuncentrazione di u campione era da 1,0 à 80 g/mL è a risposta era lineare (r > 0,999). U metudu hà mostratu recuperi di 97,2-101,2 in l'intervallu di cuncentrazione di 5-40 g/mL è a riproducibilità era inferiore à 1,0% di deviazione standard relativa. Inoltre, u LOD è u LOQ osservati eranu 0,1 g mL−1 è 0,2 g mL−124, rispettivamente. Lutter et al. (2011) anu determinatu a contaminazione da melamina in u latte di vacca è in a formula per lattanti à base di latte utilizendu HPLC-UV. E cuncentrazioni di melamina variavanu da < 0,2 à 2,52 mg kg−1. A gamma dinamica lineare di u metudu HPLC-UV era da 0,05 à 2,5 mg kg−1 per u latte di vacca, da 0,13 à 6,25 mg kg−1 per a formula per lattanti cù una frazione di massa proteica di <15%, è da 0,25 à 12,5 mg kg−1 per a formula per lattanti cù una frazione di massa proteica di 15%. I risultati LOD (è LOQ) eranu 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) per u latte di vacca, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) per a formula per lattanti <15% proteine, è 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) per a formula per lattanti 15% proteine, cù un rapportu segnale-rumore di 3 è 1025 per LOD è LOQ, rispettivamente. Diebes et al. (2012) anu investigatu i livelli di melamina in campioni di formula per lattanti è latte in polvere utilizendu HPLC/DMD. In a formula per i zitelli, i livelli più bassi è più alti eranu 9,49 mg kg−1 è 258 mg kg−1, rispettivamente. U limite di rilevazione (LOD) era 0,05 mg kg−1.
Javaid et al. anu signalatu chì i residui di melamina in a formula per i zitelli eranu in l'intervallu di 0,002-2 mg kg−1 per spettroscopia infrarossa à trasformata di Fourier (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai et al.27 anu prupostu un metudu HPLC-DDA (λ = 220 nm) per stimà a melamina è anu ottenutu un LOQ di 0,08 μg mL−1 per u latte in polvere, chì era più bassu di u livellu ottenutu in questu studiu. Sun et al. anu sviluppatu un RP-HPLC-DAD per a rilevazione di melamina in u latte liquidu per estrazione in fase solida (SPE). Anu ottenutu un LOD è un LOQ di 18 è 60 μg kg−128, rispettivamente, chì hè più sensibile di u studiu attuale. Montesano et al. hà cunfirmatu l'efficacità di u metudu HPLC-DMD per a valutazione di u cuntenutu di melamina in i supplementi proteichi cù un limite di quantificazione di 0,05-3 mg/kg, chì era menu sensibile chè u metudu utilizatu in questu studiu29.
Senza dubbitu, i laboratori analitici ghjocanu un rollu impurtante in a prutezzione di l'ambiente monitorizendu l'inquinanti in diversi campioni. Tuttavia, l'usu di un gran numeru di reagenti è solventi durante l'analisi pò purtà à a furmazione di residui periculosi. Dunque, a chimica analitica verde (GAC) hè stata sviluppata in u 2000 per riduce o eliminà l'effetti avversi di e procedure analitiche nantu à l'operatori è l'ambiente26. I metudi tradiziunali di rilevazione di a melamina, cumprese a cromatografia, l'elettroforesi, l'elettroforesi capillare è u test immunoassorbente ligatu à enzimi (ELISA), sò stati aduprati per identificà a melamina. Tuttavia, trà i numerosi metudi di rilevazione, i sensori elettrochimici anu attiratu molta attenzione per via di a so eccellente sensibilità, selettività, tempu d'analisi rapidu è caratteristiche faciule d'utilizà30,31. A nanotecnologia verde utilizza vie biologiche per sintetizà nanomateriali, chì ponu riduce a generazione di rifiuti periculosi è u cunsumu d'energia, prumove cusì l'implementazione di pratiche sustenibili. I nanocompositi, per esempiu, fatti da materiali rispettosi di l'ambiente, ponu esse aduprati in biosensori per rilevà sostanze cum'è a melamina32,33,34.
U studiu mostra chì a microestrazione in fase solida (SPME) hè aduprata efficacemente per via di a so maggiore efficienza energetica è sustenibilità paragunata à i metudi d'estrazione tradiziunali. U rispettu di l'ambiente è l'efficienza energetica di SPME ne facenu una eccellente alternativa à i metudi d'estrazione tradiziunali in chimica analitica è furniscenu un metudu più sustenibile è efficiente per a preparazione di i campioni35.
In u 2013, Wu et al. anu sviluppatu un biosensore di risonanza plasmonica di superficie (mini-SPR) assai sensibile è selettivu chì utilizza l'accoppiamentu trà l'anticorpi di melamina è anti-melamina per rilevà rapidamente a melamina in a formula per i zitelli utilizendu un immunodosaggio. U biosensore SPR cumminatu cù un immunodosaggio (utilizendu albumina sierica bovina cunjugata à melamina) hè una tecnulugia faciule d'utilizà è à bassu costu cù un limite di rilevazione di solu 0,02 μg mL-136.
Nasiri è Abbasian anu utilizatu un sensore portatile à altu putenziale in cumbinazione cù cumposti d'ossidu di grafene-chitosanu (GOCS) per rilevà a melamina in campioni cummerciali37. Stu metudu hà dimustratu una selettività, una precisione è una risposta ultra-alte. U sensore GOCS hà dimustratu una sensibilità rimarchevule (239,1 μM−1), una gamma lineare da 0,01 à 200 μM, una costante d'affinità di 1,73 × 104 è un LOD finu à 10 nM. Inoltre, un studiu realizatu da Chandrasekhar et al. in u 2024 hà aduttatu un approcciu ecologicu è economicu. Anu utilizatu l'estrattu di buccia di papaia cum'è agente riduttore per sintetizà nanoparticelle d'ossidu di zincu (ZnO-NP) in un metudu ecologicu. In seguitu, hè stata sviluppata una tecnica unica di spettroscopia micro-Raman per a determinazione di a melamina in a formula per i zitelli. E ZnO-NP derivate da i rifiuti agriculi anu dimustratu un putenziale cum'è un preziosu strumentu diagnosticu è una tecnulugia affidabile è à bassu costu per u monitoraghju è a rilevazione di a melamina38.
Alizadeh et al. (2024) anu utilizatu una piattaforma di fluorescenza à struttura metallo-organica (MOF) altamente sensibile per determinà a melamina in u latte in polvere. L'intervallu lineare è u limite di rilevazione inferiore di u sensore, determinati cù 3σ/S, eranu da 40 à 396,45 nM (equivalente à 25 μg kg−1 à 0,25 mg kg−1) è 40 nM (equivalente à 25 μg kg−1), rispettivamente. Questu intervallu hè ben al di sottu à i livelli massimi di residui (MRL) stabiliti per l'identificazione di a melamina in a formula per i zitelli (1 mg kg−1) è altri campioni di alimenti/mangimi (2,5 mg kg−1). U sensore fluorescente (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) hà dimustratu una precisione più elevata è una capacità di misurazione più precisa chè HPLC39 in a rilevazione di melamina in u latte in polvere. I biosensori è i nanocompositi in a chimica verde ùn solu migliuranu e capacità di rilevazione, ma minimizanu ancu i periculi ambientali in cunfurmità cù i principii di sviluppu sustenibile.
I principii di a chimica verde sò stati applicati à diversi metudi per a determinazione di a melamina. Un approcciu hè u sviluppu di un metudu di microestrazione in fase solida dispersiva verde chì usa u polimeru polare naturale β-ciclodestrina reticolata cù l'acidu citricu per l'estrazione efficiente di melamina 40 da campioni cum'è a formula per lattanti è l'acqua calda. Un altru metudu usa a reazione di Mannich per a determinazione di a melamina in i campioni di latte. Stu metudu hè economicu, rispettuosu di l'ambiente è assai precisu cù un intervallu lineare di 0,1-2,5 ppm è un limite di rilevazione bassu 41. Inoltre, hè statu sviluppatu un metudu economicu è rispettuosu di l'ambiente per a determinazione quantitativa di a melamina in u latte liquidu è a formula per lattanti utilizendu a spettroscopia di trasmissione infrarossa à trasformata di Fourier cù alta precisione è limiti di rilevazione di 1 ppm è 3,5 ppm, rispettivamente 42. Quessi metudi dimostranu l'applicazione di i principii di a chimica verde à u sviluppu di metudi efficienti è sustenibili per a determinazione di a melamina.
Parechji studii anu prupostu metudi innovativi per a rilevazione di melamina, cum'è l'usu di l'estrazione in fase solida è a cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC)43, è ancu a cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) rapida, chì ùn richiede micca un pretrattamentu cumplessu o reagenti à coppie di ioni, riducendu cusì a quantità di rifiuti chimichi44. Quessi metudi ùn solu furniscenu risultati accurati per a determinazione di melamina in i prudutti lattieri, ma rispettanu ancu i principii di a chimica verde, minimizendu l'usu di chimichi periculosi è riducendu l'impattu ambientale generale di u prucessu analiticu.
Quaranta campioni di diverse marche sò stati testati in triplicatu, è i risultati sò presentati in a Tavula 2. I livelli di melamina in i campioni di latte artificiale per lattanti è di latte in polvere variavanu rispettivamente da 0,001 à 0,004 mg/kg è da 0,001 à 0,095 mg/kg. Nisun cambiamentu significativu hè statu osservatu trà i trè gruppi d'età di u latte artificiale per lattanti. Inoltre, a melamina hè stata rilevata in l'80% di u latte in polvere, ma u 65% di e formule per lattanti eranu contaminate da melamina.
U cuntenutu di melamina in u latte in polvere industriale era più altu chè in a formula per i zitelli, è a differenza era significativa (p <0,05) (Figura 2).
I risultati ottenuti eranu sottu à i limiti stabiliti da a FDA (sottu à 1 è 2,5 mg/kg). Inoltre, i risultati sò in linea cù i limiti stabiliti da CAC (2010) è EU45,46, vale à dì chì u limite massimu permessu hè 1 mg kg-1 per u latte artificiale è 2,5 mg kg-1 per i prudutti lattieri.
Sicondu un studiu di u 2023 da Ghanati et al.47, u cuntenutu di melamina in diversi tipi di latte imballatu in Iran variava da 50,7 à 790 μg kg−1. I so risultati eranu inferiori à u limite permessu da a FDA. I nostri risultati sò inferiori à quelli di Shoder et al.48 è Rima et al.49. Shoder et al. (2010) anu trovu chì i livelli di melamina in u latte in polvere (n=49) determinati da ELISA variavanu da 0,5 à 5,5 mg/kg. Rima et al. anu analizatu i residui di melamina in u latte in polvere per spettrofotometria di fluorescenza è anu trovu chì u cuntenutu di melamina in u latte in polvere era 0,72-5,76 mg/kg. Un studiu hè statu realizatu in Canada in u 2011 per monitorà i livelli di melamina in a formula per i zitelli (n=94) utilizendu a cromatografia liquida (LC/MS). E concentrazioni di melamina sò state trovate inferiori à u limite accettabile (standard preliminare: 0,5 mg kg−1). Hè improbabile chì i livelli fraudulenti di melamina rilevati fussinu una tattica aduprata per aumentà u cuntenutu di proteine. Tuttavia, ùn si pò spiegà cù l'usu di fertilizanti, a rilocazione di u cuntenutu di u cuntenitore, o fattori simili. Inoltre, a fonte di melamina in u latte in polvere impurtatu in Canada ùn hè stata divulgata50.
Hassani et al. anu misuratu u cuntenutu di melamina in u latte in polvere è in u latte liquidu in u mercatu iranianu in u 2013 è anu trovu risultati simili. I risultati anu dimustratu chì, eccettu per una marca di latte in polvere è di latte liquidu, tutti l'altri campioni eranu contaminati cù melamina, cù livelli chì varianu da 1,50 à 30,32 μg g−1 in u latte in polvere è da 0,11 à 1,48 μg ml−1 in u latte. In particulare, l'acidu cianurico ùn hè statu rilevatu in alcunu di i campioni, riducendu a pussibilità di avvelenamentu da melamina per i cunsumatori. 51 Studi precedenti anu valutatu a cuncentrazione di melamina in i prudutti di cioccolatu chì cuntenenu latte in polvere. Circa u 94% di i campioni impurtati è u 77% di i campioni iraniani cuntenianu melamina. I livelli di melamina in i campioni impurtati variavanu da 0,032 à 2,692 mg/kg, mentre quelli in i campioni iraniani variavanu da 0,013 à 2,600 mg/kg. In generale, a melamina hè stata rilevata in l'85% di i campioni, ma solu una marca specifica avia livelli superiori à u limite permessu.44 Tittlemier et al. anu signalatu livelli di melamina in u latte in polvere chì varianu da 0,00528 à 0,0122 mg/kg.
A tavula 3 riassume i risultati di a valutazione di u risicu per i trè gruppi d'età. U risicu era menu di 1 in tutti i gruppi d'età. Cusì, ùn ci hè micca risicu per a salute micca cancerogenu da a melamina in a formula per i zitelli.
I livelli più bassi di contaminazione in i prudutti lattieri ponu esse dovuti à una contaminazione involuntaria durante a preparazione, mentre chì i livelli più alti ponu esse dovuti à aggiunte intenzionali. Inoltre, u risicu generale per a salute umana derivante da u cunsumu di prudutti lattieri cù bassi livelli di melamina hè cunsideratu bassu. Si pò cunclude chì u cunsumu di prudutti chì cuntenenu tali bassi livelli di melamina ùn pone alcun risicu per a salute di i cunsumatori52.
Cunsiderendu l'impurtanza di a gestione di a sicurezza alimentaria in l'industria lattiera, in particulare in termini di prutezzione di a salute publica, hè di primura sviluppà è validà un metudu per valutà è paragunà i livelli è i residui di melamina in u latte in polvere è in a formula per i lattanti. Un metudu spettrofotometricu HPLC-UV simplice è precisu hè statu sviluppatu per a determinazione di a melamina in a formula per i lattanti è in u latte in polvere. U metudu hè statu validatu per assicurà a so affidabilità è a so precisione. I limiti di rilevazione è quantificazione di u metudu sò stati dimustrati abbastanza sensibili per misurà i livelli di melamina in a formula per i lattanti è in u latte in polvere. Sicondu i nostri dati, a melamina hè stata rilevata in a maiò parte di i campioni iraniani. Tutti i livelli di melamina rilevati eranu inferiori à i limiti massimi permessi stabiliti da u CAC, ciò chì indica chì u cunsumu di sti tipi di prudutti lattieri ùn rapprisenta micca un risicu per a salute umana.
Tutti i reagenti chimichi utilizati eranu di qualità analitica: melamina (2,4,6-triamino-1,3,5-triazina) pura à 99% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); acetonitrile di qualità HPLC (Merck, Darmstadt, Germania); acqua ultrapura (Millipore, Morfheim, Francia). Filtri per siringa monouso (Chromafil Xtra PVDF-45/25, dimensione di i pori 0,45 μm, diametru di a membrana 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Germania).
Un bagnu à ultrasoni (Elma, Germania), una centrifuga (Beckman Coulter, Krefeld, Germania) è HPLC (KNAUER, Germania) sò stati utilizati per preparà i campioni.
Hè statu utilizatu un cromatografu liquidu d'alta prestazione (KNAUER, Germania) equipatu cù un detector UV. E cundizioni d'analisi HPLC eranu e seguenti: hè statu utilizatu un sistema UHPLC Ultimate equipatu cù una colonna analitica ODS-3 C18 (4,6 mm × 250 mm, dimensione di e particelle 5 μm) (MZ, Germania). L'eluente HPLC (fase mobile) era una mistura TFA/metanolo (450:50 mL) cù una velocità di flussu di 1 mL min-1. A lunghezza d'onda di rilevazione era di 242 nm. U vulume di iniezione era di 100 μL, a temperatura di a colonna era di 20 °C. Siccomu u tempu di ritenzione di a droga hè longu (15 minuti), a prossima iniezione deve esse fatta dopu à 25 minuti. A melamina hè stata identificata paragunendu u tempu di ritenzione è u piccu di u spettru UV di i standard di melamina.
Una suluzione standard di melamina (10 μg/mL) hè stata preparata cù acqua è cunservata in un frigorifero (4 °C) luntanu da a luce. Diluite a suluzione stock cù a fase mobile è preparate suluzioni standard di travagliu. Ogni suluzione standard hè stata iniettata in l'HPLC 7 volte. L'equazione di calibrazione 10 hè stata calculata per analisi di regressione di l'area di piccu determinata è di a cuncentrazione determinata.
U latte in polvere di vacca dispunibule cummercialmente (20 campioni) è campioni di diverse marche di formula per lattanti à base di latte di vacca (20 campioni) sò stati acquistati da supermercati è farmacie lucali in Iran per alimentà i neonati di diverse fasce d'età (0-6 mesi, 6-12 mesi è >12 mesi) è cunservati à temperatura refrigerata (4 °C) finu à l'analisi. Dopu, 1 ± 0,01 g di latte in polvere omogeneizatu hè statu pesatu è mischiatu cù acetonitrile:acqua (50:50, v/v; 5 mL). A mistura hè stata agitata per 1 minutu, poi sonicata in un bagnu à ultrasoni per 30 minuti, è infine agitata per 1 minutu. A mistura hè stata poi centrifugata à 9000 × g per 10 minuti à temperatura ambiente è u surnatante hè statu filtratu in una fiala di autocampionatore di 2 ml utilizendu un filtru à siringa di 0,45 μm. U filtratu (250 μl) hè statu tandu mischiatu cù acqua (750 μl) è iniettatu in u sistema HPLC10,42.
Per validà u metudu, avemu determinatu a ricuperazione, a precisione, u limite di rilevazione (LOD), u limite di quantificazione (LOQ) è a precisione in cundizioni ottimali. U LOD hè statu definitu cum'è u cuntenutu di u campione cù una altezza di piccu trè volte u livellu di rumore di basa. D’altronde, u cuntenutu di u campione cù una altezza di piccu 10 volte u rapportu segnale-rumore hè statu definitu cum'è u LOQ.
A risposta di u dispusitivu hè stata determinata aduprendu una curva di calibrazione cumposta da sette punti di dati. Sò stati aduprati diversi cuntenuti di melamina (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 è 1,2). A linearità di a prucedura di calculu di a melamina hè stata determinata. Inoltre, parechji livelli diversi di melamina sò stati aghjunti à i campioni bianchi. A curva di calibrazione hè stata custruita iniettendu continuamente 0,1-1,2 μg mL−1 di una soluzione standard di melamina in campioni di formula per lattanti è di latte in polvere è u so R2 = 0,9925. A precisione hè stata valutata da a ripetibilità è a riproducibilità di a prucedura è hè stata ottenuta iniettendu campioni u primu ghjornu è i trè ghjorni successivi (in triplicatu). A ripetibilità di u metudu hè stata valutata calculendu a RSD % per trè diverse concentrazioni di melamina aghjunta. Studi di recuperu sò stati realizati per determinà a precisione. U gradu di ricuperazione per via di u metudu d'estrazione hè statu calculatu à trè livelli di cuncentrazione di melamina (0,1, 1,2, 2) in campioni di latte artificiale è latte in polvere9,11,15.
L'assunzione ghjurnaliera stimata (EDI) hè stata determinata aduprendu a formula seguente: EDI = Ci × Cc/BW.
Induve Ci hè u cuntenutu mediu di melamina, Cc hè u cunsumu di latte è BW hè u pesu mediu di i zitelli.
L'analisi di i dati hè stata realizata cù SPSS 24. A nurmalità hè stata testata cù u test di Kolmogorov-Smirnov; tutti i dati eranu test non parametrici (p = 0). Dunque, u test di Kruskal-Wallis è u test di Mann-Whitney sò stati utilizati per determinà differenze significative trà i gruppi.
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